En su sexta fecha que se jugó el 29 de marzo, le tocaría enfrentar a la Selección Colombiana en la ciudad de Barranquilla en el Estadio Metropolitano donde al igual que el partido anterior, el partido destaco más por los errores de los propios jugadores , que le costaron caro ya que la tri presentaría su primera derrota en la eliminatoria de 3 a 1, desde iniciado el juego, el cuadro colombiano desde el minuto 10 comandado por James Rodríguez, David Ospina, y Juan Cuadrado, domino a la tri, el primer gol colombino llegaría tras una buen pase de James Rodríguez como un mal despeje por parte de los defensas Gabriel Achilier y Frickson Erazo, haciendo que Carlos Bacca marcara a los 15, el segundo gol llegaría cuando Juan Carlos Paredes despejaría mal a Edwin Cardona, quien daría un buen pase Sebastián Pérez marcando el 2 a 0 al minuto 47, el tercer gol, llegaría cuando Alexander Domínguez al sacar la pelota del arco ecuatoriano Jefferson Montero no lograría alcanzar la pelota, siendo esquivada por Sebastián Pérez, que sería alcanzado por James Rodríguez y Juan Cuadrado, quienes mandarían a Carlos Bacca marcaria a los 67 minutos, la tricolor solo lograría descontar al minuto 90, cuando Gustavo Cuéllar cometería falta a Pedro Quiñónez, a lo que el árbitro pitaría tiro libre, tiro que Michael Arroyo convertiría el gol, finalizando esa fecha la Tri que en la anterior partido se encontraba en el puesto 1, había bajado al puesto 2, lo que nuevamente generó inconformidad a la selección y a la población ecuatoriana, camiseta de qatar mundial 2022 por la mala imagen que demostró en ese partido.