En la décimo sexta fecha, la tricolor estaba obligada a ganar a la selección Peruana, quien en ese 2017 al mando de Ricardo Gareca venía en una racha impecable al lograr una importante victoria ante Bolivia en el Monumental, lo que mantenía como un rival directo para la clasificación algo que no había pasado desde la dura eliminación que sufrió en la eliminatorias Francia 1998, al mismo tiempo la selección peruana con esos resultados había limpiado su imagen ante el destrozó camino que tuvo en las eliminatorias Sudáfrica 2010 y la mala racha en las eliminatorias Brasil 2014, en este partido nuevamente el estadio Olímpico Atahualpa, que fue acusado de estar en mal estado por diferentes analistas, fue la sede del partido, en Quito, antes de iniciado el partido la afición ecuatoriana estaba expectante esperando que la tricolor conseguiria su pase al mundial, sin embargo entre había diferentes opiniones que no sólo decían que ecuador no conseguirá la clasificación con el partido con Perú, entre esas opiniones se encontraban nuevamente históricos de la tricolor como Iván Hurtado, Ulises de la Cruz, Eduardo Hurtado, José Francisco Cevallos, Jaime Iván Kaviedes, Alfonso Obregón, Neiser Reasco, Agustín Delgado, Carlos Tenorio, y Edison Méndez quienes afirmaban que la tricolor no se llevaría la victoria, asegurando que la selección peruana lograría empatar o sacar un punto del partido, sin embargo una de las opiniones de los jugadores históricos que más causó polémica y en cierto punto fue tomado como troleo, fue la de Álex Aguinaga quien afirmó que la Tricolor no sólo conseguiría un buen resultado, sino que perdería el partido ante la selección comandada por Ricardo Gareca, tomando como base los errores, virtudes y aciertos que tuvieron que tuvo la selección peruana jugando de visita o en la altura, lo mismo con la tricolor jugando de Local, Para este partido la tricolor alineó en línea 1-4-4-2, con la Máximo Banguera en el arco, Gabriel Achilier, Robert Arboleda, Cristian Ramírez, Pedro Velasco, Jefferson Orejuela, Cristian Noboa, Antonio Valencia, Juan Cazares, Felipe Caicedo y Enner Valencia, siendo similar al caso de Alexander Domínguez, Pedro Gallese no fue puesto en la portería peruana sino por Carlos Caceda, quien sería acompañado por Aldo Corzo, Cristian Ramos, Alberto Rodríguez, Miguel Tauco, Renato Tapia, Yoshimar Yotun, Edison Flores, Cristian Cueva, Andrés Carillo, y su capitán Paolo Guerrero con 4-2-3-1, el partido se jugó el 5 de septiembre, a las 16:00 p. m., desde el primer tiempo la tricolor trato de intimidar a la selección peruana con ataques precisos de Enner Valencia y Jefferson Orejuela, sin embargo ante una poca efectividad de Felipe Caicedo, Cristian Ramírez y Juan Cazares, como ante sólida defensa peruana comandada por Paolo Guerrero no pudo hacer efectivo al ataque ecuatoriano, el primer tiempo concluyó con una imagen sumamente agridulce de la tricolor, pero con una buena actuación en la portería de Máximo Banguera que logró retener los ataques peruanos de Cristian Ramos, Aldo Corzo y Cristian Cueva, para el segundo tiempo los errores regresaron donde ante malos pases por parte de Gabriel Achilier, Juan Cazares, y Pedro Velasco, la selección peruana aprovecharon dichos errores para atacar a la tricolor, al minuto Gustavo Quinteros hizo un cambio que afectaría negativamente el rendimiento de la tricolor, cambió a Felipe Caicedo por el lateral Marcos Caicedo que poco nada hizo para frenar en el partido, al minuto 73 tras un pésimo pase de Pedro Velasco mando la pelota a Edison Flores, y aprovechando lo descoordinada que estaba la defensa comandada por Gabriel Achilier, Edison Flores logró marcar el gol de la victoria peruana, el segundo gol llegaría cuando Ricardo Gareca reemplazo a André Carillo a Paolo Hurtado, al minuto 76 en una jugada combinada entre Paolo Guerrero, Cristian Cueva con Paolo Hurtado, lograron derrotar a la defensa ecuatoriana como a Máximo Banguera, a lo que Paolo Hurtado marcó el segundo del encuentro, la tricolor logró únicamente descontar al minuto 79 cuando Enner Valencia en una jugada individual, fue derribado por Cristian Ramos, siendo expulsado por tarjeta por el árbitro paraguayo Enrique Cáceres, ante la falta se cobró penal a favor de la tricolor donde Enner Valencia marcaría gol ante el arquero peruano Carlos Caceda, el partido concluyó al minuto 95, con una victoria histórica de Perú lo que matemáticamente la ponía en zona de clasificación, por su parte la tricolor que ya de por sí había logrado una racha negativa de tener hasta ese tiempo cuatro derrotas consecutivas algo que no había pasado desde los procesos clasificatorios a Estados Unidos 1994, perjudico no sólo su diferencia de gol, sino que la estanco en el puesto octavo dando cavida a que Perú, Paraguay y Chile tuvieran oportunidades de clasificar, al mismo tiempo que rompió un invicto de 39 años de nunca haber perdido de Local ante Perú.